中文
英語
Bambanker無血清細(xì)胞凍存液
| 品牌 | 貨號 | 規(guī)格 | 價格 |
|---|---|---|---|
| Nippon Genetics | BB01 | 120ml | 1684元 |
| Nippon Genetics | BB02 | 5*20ml | 1813元 |
| Nippon Genetics | BB03 | 20ml | 481元 |
冷凍保存哺乳動物細(xì)胞在生物學(xué)研究中非常有價值和普遍。為了防止技術(shù)原因（培養(yǎng)操作）使細(xì)胞污染或物理原因（培養(yǎng)箱故障）使長期培養(yǎng)功虧一簣。此外，長期多次的培養(yǎng)和傳代，導(dǎo)致細(xì)胞在遺傳學(xué)性狀上的老化和分化都是促使在接收或生成新細(xì)胞系后首要考慮的最佳策略就是凍存細(xì)胞。低溫凍存對于維持一些特殊細(xì)胞株的遺傳特性極為重要。細(xì)胞深低溫保存的基本原理是：在-70℃以下時，細(xì)胞內(nèi)的酶活性均己停止，即代謝處于完全停止?fàn)顟B(tài)，故可以長期保存。細(xì)胞低溫保存的關(guān)鍵，在于通過0℃到-20℃階段的處理過程。在此溫度范圍內(nèi)，冰晶呈針狀，極易招致細(xì)胞的嚴(yán)重?fù)p傷。 如何減少或者避免冰晶形成，如同凍存細(xì)菌時用的甘油，DMSO（二甲基亞砜）是一種滲透性保護(hù)劑，能夠降低細(xì)胞冰點，減少冰晶的形成，減輕自由基對細(xì)胞損害，改變生物膜對電解質(zhì)、藥物、毒物和代謝產(chǎn)物的通透性。凍存液中加入后可以使溶液冰點降低，加之在緩慢凍結(jié)條件下，細(xì)胞內(nèi)的水分逐漸透出，從而減少了冰晶的形成，從而避免細(xì)胞的損傷。這就是為什么低溫凍存細(xì)胞時為什么要采用慢凍的一個重要原因。 一旦從生長培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到冷凍培養(yǎng)基中，就要執(zhí)行慢凍的過程。盡管冷凍細(xì)胞系是通常執(zhí)行的程序，但是當(dāng)沒有合適的冷凍器具時，或者由于存在血清，額外洗滌或操作不當(dāng)時，就會出現(xiàn)問題。當(dāng)然，這個問題是在細(xì)胞復(fù)蘇（快融）后才發(fā)現(xiàn)的。發(fā)現(xiàn)復(fù)蘇后的細(xì)胞大部分或者全部都是死細(xì)胞，甚至還有不容易發(fā)現(xiàn)的整個凍存過程的不當(dāng)導(dǎo)致的細(xì)胞分化。所有這些問題和擔(dān)憂，都可以通過BambankerTM細(xì)胞冷凍培養(yǎng)基試劑家族來解決。 BambankerTM獨特的成分允許直接將細(xì)胞在-80°C或液氮中冷凍保存，從而避免了對額外設(shè)備的需求，并且也避免了耗時且復(fù)雜的梯度逐漸冷凍方案。 產(chǎn)品特色 ? 可在-80°C或-196°C的溫度下長期凍存細(xì)胞 ? 細(xì)胞復(fù)蘇后的活率高 ? 即用型冷凍介質(zhì)–無需程序或順序降溫冷凍 ? 無血清–無污染風(fēng)險 ? 可用于所有已知細(xì)胞系 ? 保質(zhì)期長 省時省事省力省細(xì)胞（Save time while saving your cells） 細(xì)胞冷凍培養(yǎng)基BambankerTM允許在-80°C（或液氮）中冷凍保存細(xì)胞，從而避免了對額外的設(shè)備的需求，避免了耗時且復(fù)雜的受控冷凍方案。只需（1）離心收獲細(xì)胞，（2）抽吸走培養(yǎng)基，（3）細(xì)胞重懸浮在BambankerTM中（4）混勻轉(zhuǎn)移到冷凍管中（5）儲存在-80°C下。無需程序降溫或順序降溫！ BambankerTM是一種無血清的冷凍保存介質(zhì)，可以立即使用，并且可以在冰箱中保存長達(dá)兩年。提供20毫升規(guī)格的包裝，使BambankerTM冷凍培養(yǎng)基非常適合實驗室的各個成員獨立使用。如今，這種創(chuàng)新的細(xì)胞冷凍培養(yǎng)基BambankerTM已成為日本市場的領(lǐng)導(dǎo)者，其特點是發(fā)表了許多篇文章，涉及全世界非常敏感的細(xì)胞系。
血清增加了長期儲存的差異（Serum adds variation to long-term storage） 所有BambankerTM產(chǎn)品均不含血清。含有血清的冷凍保存培養(yǎng)基具有回收率波動和成分不確定的缺點。凍存于含血清的培養(yǎng)基中的細(xì)胞的實驗可重復(fù)性可能會受到批次之間血清差異的影響，因為蛋白質(zhì)和其他生物分子的組成和濃度會隨每批血清而變化。解凍和使用這種含血清培養(yǎng)基的細(xì)胞時，可能會導(dǎo)致問題。因為BambankerTM的每種成分都經(jīng)過精確定義，因此您可以放心，在不同時間存儲的細(xì)胞都將有一致的效率。 BambankerTM可防止不期望的分化（BambankerTM prevents undesired differentiation） 不期望的細(xì)胞分化也可能是冷凍細(xì)胞長期保存的一個問題。 所有Bambanker試劑均旨在最大程度地減少此問題。 對于特別麻煩的細(xì)胞，Bambanker不含DMSO的配方經(jīng)過特殊配制，可防止可能與含DMSO的冷凍保存試劑相關(guān)的問題。 因此，請加入越來越多的實驗室的選擇，使用Bambanker保護(hù)其細(xì)胞系！
多能干細(xì)胞的細(xì)胞活力和ALP染色 上排：解凍兩天后檢測到大量細(xì)胞。 解凍后細(xì)胞沒有形態(tài)變化 下排：BambankerTM不會引起細(xì)胞分化，因為所有凍結(jié)的干細(xì)胞仍會產(chǎn)生高水平的堿性磷酸酶，這是多能干細(xì)胞的報告基因 細(xì)胞凍存液家族（Family of BambankerTM）
Bambanker 細(xì)胞凍存液-細(xì)胞凍存、解凍操作步驟 ?凍存操作步驟：慢凍 ①從細(xì)胞培養(yǎng)箱中取出培養(yǎng)中處于對數(shù)增殖期的細(xì)胞。※凍存對數(shù)增殖期的細(xì)胞，是可以確保細(xì)胞良好生存率中最重要的一點。 ②使用部分細(xì)胞用臺盼藍(lán)染色（檢測活率）并計數(shù)細(xì)胞數(shù)量。 ③將含細(xì)胞的培養(yǎng)基移至離心管中，在合適條件（低離心力，必要低溫）下進(jìn)行離心。 ④去除上清液后，將細(xì)胞沉淀通過輕柔旋渦操作進(jìn)行懸浮。 ⑤每個凍存管中細(xì)胞數(shù)要保持規(guī)定濃度，然后再添加凍存液。 （每 1mLBambanker凍存液可凍存 5×105～1×107 個細(xì)胞）※⑤之后的操作步驟盡可能快速完成。另外，Bambanker凍存液從冷藏柜取出后，直接使用，無須平衡室溫，盡快進(jìn)行保存處理 。 ⑥無需預(yù)冷細(xì)胞懸浮液，直接置于-80℃下保存。 ⑦保存液氮時，先在-80℃保存 12 小時（超過一晚），待狀態(tài)穩(wěn)定后在移至液氮中保存。※轉(zhuǎn)移細(xì)胞時請盡快完成操作。 ?解凍操作步驟：快融 ①在 37℃恒溫箱（或者37℃水浴鍋）等設(shè)備中解凍細(xì)胞，確認(rèn)凍存管中液體完全融解。※此操作需迅速進(jìn)行。因為細(xì)胞在解凍過程過極易受到損壞。 ②將溶解的細(xì)胞液轉(zhuǎn)移到含有培養(yǎng)基的15ml無菌離心管中，混合完全后在規(guī)定條件下進(jìn)行離心 （比如：300～400×g） ③去除上清液后，加入少量培養(yǎng)基，將細(xì)胞沉淀通過輕柔旋渦操作進(jìn)行懸浮。 ④完全混勻后，取出其中一部分細(xì)胞用臺盼藍(lán)染色（檢測活率）并計數(shù)細(xì)胞數(shù)量。 ⑤將混勻的細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)容器中，細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)。
常見問題（FAQ） Q1. Bambanker凍存液可以使用的最小體積是多少？ 對于1*106個細(xì)胞，建議使用1 mL，對于較少的細(xì)胞，您可以減少Bambanker的用量。 例如，對于5×10 ^ 5，請使用0.5 mL。 Q2. Bambanker凍存液是否包含DMSO？ 除Bambanker DMSO-Free（BBF01）外，Bambanker的其他三種均包含DMSO。 Q3. 復(fù)蘇培養(yǎng)時，我們可以在不進(jìn)行細(xì)胞洗滌的情況下直接在培養(yǎng)基中使用解凍的細(xì)胞嗎？ 是的，您不需要清洗步驟。 Q4. 可以將在Bambanker中冷凍的細(xì)胞用于提取RNA嗎？ 可以。 但是請注意，每個試管中的細(xì)胞數(shù)少（1*106個細(xì)胞）可能會導(dǎo)致分離出的RNA少。 Q5. 我們可以使用Bambanker進(jìn)行PBMC的冷凍保存嗎？ 可以，請參閱以下最新出版物： https://onlinelibrary.wiley.com/doi/pdf/10.1111/bjh.15995 https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S1051044319302933 PBMC凍存的一個案例： 實驗方案： i）從健康人的血液中分離出PBMC ii）PBMC在Bambanker（標(biāo)準(zhǔn)版）中冷凍，并在-80°C和-196°C（液氮）中以1×10 ^ 6細(xì)胞/個保存12個月。 1mL Bambanker 1mL等分試樣 iii）冷凍后十二個月，快速融化細(xì)胞并測量細(xì)胞數(shù)，然后使用包被抗CD3抗體的T-25培養(yǎng)瓶和含IL-2（700 U / mL）的培養(yǎng)基培養(yǎng)7天。在第5、6和7天測量細(xì)胞計數(shù)，并在培養(yǎng)的第7天進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)。 實驗結(jié)果： 在-80°C下保存12個月，回收率59.5％；存活率88.9％ 儲存在液氮中（-196°C）保存12個月，回收率63.9％；存活率87.3％ 回收率=解凍后完整細(xì)胞數(shù)/最初凍存的細(xì)胞數(shù)；存活率=在設(shè)定的檢測時間點，通過臺盼藍(lán)測定的活細(xì)胞在總細(xì)胞中所占的百分比。 Q6. 您建議如何處理特別脆弱/敏感的細(xì)胞？ 冷凍技巧：冷凍敏感細(xì)胞的最佳方法是將細(xì)胞放入Bambanker（選擇合適的類型）中，并在處理過程中將其保持在4°C。將它們盡可能快地放入-80°C的冰箱中24h。然后，將細(xì)胞儲存在-80°C或?qū)⒗鋬龅募?xì)胞轉(zhuǎn)移至液氮中。 解凍技巧：將小瓶放入37°C水浴中，直到內(nèi)容物融化為止。然后應(yīng)立即將細(xì)胞轉(zhuǎn)移至大量預(yù)熱的培養(yǎng)基中-對于最敏感的細(xì)胞類型（干細(xì)胞，原代細(xì)胞），逐滴添加以保持活力。盡管某些細(xì)胞可以通過離心沉淀，然后再用移液器輕輕重懸，然后添加到裝有預(yù)熱生長培養(yǎng)基的細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，但對于大多數(shù)敏感細(xì)胞類型，將它們?nèi)诨笾苯右迫肱囵B(yǎng)瓶中的操作更為溫和。第二天進(jìn)行培養(yǎng)基更換，以除去任何殘留的防凍劑。 Q7. 我們可以使用Bambanker冷凍保存整個類器官嗎？ 是的，Bambanker和Bambanker HRM是您的最佳選擇。 兩者均可提供超過70％的恢復(fù)率。 我們建議每個冷凍管使用少量類器官（低于20 mg）。 我們還建議您先將類器官在4°C的Bambanker中浸泡10分鐘，然后再冷凍。 將正常Bambanker用于類器官，將Bambanker HRM用于人類臨床試驗或人類組織衍生的類器官。 Q8. Bambanker可以用于果蠅嗎？ 只要是凍存單個細(xì)胞，就沒有問題。 我們沒有凍存整個生物體的經(jīng)驗。 Q9.我可以使用Bambanker凍存受感染細(xì)胞中的病毒嗎？ 只要細(xì)胞保持健康，這沒問題。 Q10. 我可以直接使用Bambaker而不用將其恢復(fù)室溫（RT）嗎？ 沒問題，可以直接使用。 Q11. 如何使用Bambanker提高類器官的生存率？ 我們使用20毫克的胃和結(jié)腸組織。 您可以將正常Bambanker用于動物組織。 另外，我們建議將組織細(xì)化到20毫克以下。 您也可以在冷凍之前將組織在4°C的Bambanker中浸泡10分鐘。 有關(guān)更多信息，請查看以下文件： https://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/S009082581931212302 https://febs.onlinelibrary.wiley.com/doi/abs/10.1002/1878-0261.12662 Q12. 為什么我使用了Bambanker來保存細(xì)胞，但是存活率依然不高？ 請凍存前確保細(xì)胞處于生長對數(shù)期，并且凍存時細(xì)胞數(shù)目控制在5×105~1×107/mL凍存液。 Q13. 我們實驗室已經(jīng)有固定的凍存程序了，如果換了你們的Bambanker，可以還繼續(xù)用原來程序降溫的方法凍存嗎？ 雖然本產(chǎn)品可以無需程序降溫凍存細(xì)胞，但如果通過程序降溫盒等適當(dāng)控制了溫度下降的速度，效果更佳（如虎添翼）。 Q14. 哪些細(xì)胞株（系）適合使用Bambanker來進(jìn)行細(xì)胞冷凍保存？ 幾乎所有細(xì)胞株（系）都可以使用Bambanker進(jìn)行凍存。對于較為寶貴的ES/iPS細(xì)胞的保存尤其適用。官網(wǎng)上所列舉的細(xì)胞系均已經(jīng)過測試驗證。 但也并不排除可能有某些細(xì)胞株是不適合使用Bambanker來進(jìn)行凍存的，用戶在沒有確認(rèn)是否可使用時，建議在進(jìn)行正式細(xì)胞凍存之前先進(jìn)行預(yù)實驗。 Q15. 無血清凍存液相比傳統(tǒng)含血清凍存液有什么優(yōu)勢？ 無血清凍存液因不含有動物血清，質(zhì)量更穩(wěn)定，批間差更小；同時未知生物成分或感染性物質(zhì)污染細(xì)胞的幾率也極低，尤其對于ES/iPS細(xì)胞等有可能用于再生醫(yī)療的細(xì)胞安全得以嚴(yán)格保障；可以直接凍存無血清培養(yǎng)的細(xì)胞，免去無血清再馴化的步驟；另外Bambanker無血清細(xì)胞凍存液不需要像傳統(tǒng)的血清凍存液那樣需要程序降溫，減少了用戶的繁瑣操作，節(jié)省了時間。 Q16. Bambanker在冷凍保存細(xì)胞的過程中起什么作用？ 無血清細(xì)胞凍存液使用了DMSO（DMSO-Free除外）等作為保護(hù)劑，在凍存細(xì)胞時能以1℃/min左右的溫度下降而逐漸凍存，在此過程中，細(xì)胞內(nèi)的水分子被置換成保護(hù)劑，抑制胞內(nèi)和細(xì)胞周邊的冰晶的形成，防止細(xì)胞膜和細(xì)胞器結(jié)構(gòu)損傷，防止蛋白變性。 1.操作手冊：Bambanker_Protocol 2.宣傳彩頁：Bambanker_Fyler 3.安全數(shù)據(jù)表：Bambanker_MSDS 4.使用提示： 1). 不同品牌產(chǎn)品PK：Comparing Bambanker with another cryopreservation medium for the cultivation of 1,400 different cell lines 2). 小鼠胚胎干細(xì)胞凍存：Mouse Embryonic Stem (ES) cells preservation
1). Hatoya, S. et al. Effect of co-culturing with embryonic fibroblasts on IVM, IVF and IVC of canine oocytes. Theriogenology 66, 1083–1090 (2006). 2). Hikichi, T. et al. Differentiation potential of parthenogenetic embryonic stem cells is improved by nuclear transfer. Stem Cells 25, 46–53 (2007). 3). Huang, Y. H., Yang, J. C., Wang, C. W. & Lee, S. Y. Dental Stem Cells and Tooth Banking for Regenerative Medicine. J. Exp. Clin. Med. 2, 111–117 (2010). 4). Lechner, S. M. Interaktionen von Inseminatbestandteilen mit Epithelzellen und Leukozyten im Uterus des Rindes. (2008). 5). Liu, D. et al. Relation between human decay-accelerating factor (hDAF) expression in pig cells and inhibition of human serum anti-pig cytotoxicity: Value of highly expressed hDAF for xenotransplantation. Xenotransplantation 14, 67–73 (2007). 6). Mieno, S. et al. Effects of diabetes mellitus on VEGF-induced proliferation response in bone marrow derived endothelial progenitor cells. J. Card. Surg. 25, 618–625 (2010). 7). Mieno, S. et al. Characteristics and Function of Cryopreserved Bone Marrow-Derived Endothelial Progenitor Cells. Ann. Thorac. Surg. 85, 1361–1366 (2008). 8). Naito, H. et al. The advantages of three-dimensional culture in a collagen hydrogel for stem cell differentiation. J. Biomed. Mater. Res. – Part A 101, 2838–2845 、2013). 9). Shimizu, Y. et al. Impaired tax-specific t-cell responses with insufficient control of HTLV-1 in a subgroup of individuals at asymptomatic and smoldering stages. Cancer Sci. 100, 481–489 (2009). 10). Takata, Y. et al. Generation of iPS Cells Using a BacMam Multigene Expression System. Cell Struct. Funct. 36, 209–222 (2011). 11). Tamai, Y. et al. Potential contribution of a novel Tax epitope-specific CD4+ T cells to graft-versus-Tax effect in adult T cell leukemia patients after allogeneic hematopoietic stem cell transplantation. J. Immunol. 190, 4382–92 (2013). 12). Zaidi, S. K. et al. Runx2 deficiency and defective subnuclear targeting bypass senescence to promote immortalization and tumorigenic potential. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 104, 19861–19866 (2007). |
